КІЛЬКІСНИЙ АНАЛІЗ ЕКСПРЕСІЇ ГЕНІВ REG1Α ТА TGFB1 У КЛІТИНАХ СЛИЗОВОЇ ОБОЛОНКИ ШЛУНКУ ЩУРІВ ЗА ДІЇ СТРЕСУ
DOI:
https://doi.org/10.31861/biosystems2024.02.227Ключові слова:
стрес, виразка шлунку, ЗТ-ПЛР у реальному часі, експресія генів Reg1a, Tgfb1Анотація
Виразкова хвороба шлунку є поширеним захворюванням шлунково-кишкового тракту, смертність від якої становить 5-10 % у всьому світі. Метою роботи було кількісно проаналізувати рівень експресії генів Reg1a (кодує регенеративний білок) та Tgfb1 (кодує мультифункціональний цитокін) у клітинах слизової оболонки шлунку щурів за дії експериментального іммобілізаційного водно-імерсійного стресу. Щурів виводили з експерименту через 0,5, 1, 2, 3 год впливу стресу та через 12 і 24 год після його відміни. Експресію генів досліджували на виділеній тотальній РНК щурів за допомогою ЗТ-ПЛР у реальному часі (RT-qPCR), результати якої обчислювали відносним порівняльним методом («ΔΔCT Method»). Інтенсивність продукування супероксидного аніон-радикалу визначали за накопиченням ХТТ-формазану. Вміст білка встановлювали за методом Лоурі. Виявлено посилення експресії як гена Reg1a (на 1, 2, 3 год), так і Tgfb1 (на 0,5, 1, 2 і 3 год) на тлі зростання вмісту супероксидного аніону на 0,5, 1, 2 і 3 год під час стресового впливу. У той же час, при загоєнні виразок експресія зазначених генів наближалась до контрольних значень на 24 год після дії стресу для Reg1a; та на 12 год для Tgfb1 (рівень утворення супероксидного аніон-радикала повертався до контролю на 12 год). Наявність позитивної кореляції між патернами експресії цих генів може свідчити про їх плейотропний ефект під час регенерації виразкових пошкоджень клітин шлунку щурів.
Посилання
1. Chomczynski P, Sacchi N. (1987). Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanatephenol-chloroform extraction. Anal Biochem, 162(1), 156–9. https://doi.org/0.1006/abio.1987.9999
2. Livak KJ, Schmittgen TD. (2001), Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods, 25(4), 402-8. https://doi.org/0.1006/meth.2001.1262
3. Sutherland M. W., Learmonth B. A. (1997). The tetrazolium dyes MTS and XTT provide new quantitative assays for superoxide and superoxide dismutase. Free Radic. Res. 27, 3, 283–289. https://doi.org/10.3109/10715769709065766
4. Zhou, Z., Huang, P., Song, G., et al. (2017). Comparative proteomic analysis of rats subjected to water immersion and restraint stress as an insight into gastric ulcers. Molecular Medicine Reports, 16, 5425-5433. https://doi.org/10.3892/mmr.2017.7241
5. Hongli M., Jinlin J., Jinxiu S., Shanfeng Zhang, et al. (2021). Protective and anti-inflammatory role of REG1A in inflammatory bowel disease induced by JAK/STAT3 signaling axis. International Immunopharmacology, 107304, https://doi.org/10.1016/j.intimp.2020.107304
6. Magierowska K., Bakalarz D., Wójcik D., et al. (2019). Time-dependent course of gastric ulcer healing and molecular markers profile modulated by increased gastric mucosal content of carbon monoxide released from its pharmacological donor. Biochemical Pharmacology, 163, 71-83, https://doi.org/10.1016/j.bcp.2019.02.011
